一、 不用選版本、不用加步驟-珀羅汀無(wú)細(xì)胞試劑盒，默認(rèn)支持二硫鍵合成

在蛋白表達(dá)這件事上，你有沒有遇到過(guò)這樣的情況？

排查到最后，問(wèn)題往往指向同一個(gè)原因——二硫鍵沒有正確形成。

二、二硫鍵形成，真的是無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)的進(jìn)階需求嗎？

對(duì)于一些老牌的無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)體系：

普通蛋白→普通表達(dá)體系

含二硫鍵蛋白→換體系、加試劑、多一步優(yōu)化、多一筆費(fèi)用

于是，二硫鍵形成被默認(rèn)為一種“需要額外付出"的高級(jí)選項(xiàng)。

然而，大量功能蛋白、相互作用蛋白、分泌蛋白，本來(lái)就依賴二硫鍵。它并不“高級(jí)"， 而是許多功能蛋白與分泌蛋白賴以成立的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)。珀羅汀無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)體系在設(shè)計(jì)之初，便將二硫鍵形成作為默認(rèn)條件之一，使蛋白在體外也能更接近其天然構(gòu)象。

三、為什么二硫鍵在一些傳統(tǒng)無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)體系里面這么麻煩？

以一些傳統(tǒng)的大腸桿菌無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)體系為例，因?yàn)轶w系環(huán)境偏還原性，因此二硫鍵難以穩(wěn)定形成

因此，這些老牌的無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)試劑盒，想要二硫鍵，往往意味著：

復(fù)雜、昂貴，而且不確定。

四、 珀羅汀無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)體系：把“二硫鍵"從增配選項(xiàng)，變成“默認(rèn)設(shè)置“

在珀羅汀看來(lái)，一個(gè)更合理的問(wèn)題不是：這個(gè)蛋白要不要做二硫鍵？

而是：為什么表達(dá)體系不能一開始就為二硫鍵做好準(zhǔn)備？

因此，珀羅汀的無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)試劑盒，從設(shè)計(jì)之初就遵循一個(gè)原則：默認(rèn)支持二硫鍵的形成

? 無(wú)需區(qū)分“普通型 / 二硫鍵增強(qiáng)型"

? 無(wú)需額外添加輔助因子

? 無(wú)需額外實(shí)驗(yàn)步驟

? 無(wú)需額外費(fèi)用

開箱即用，二硫鍵已就位。

五、對(duì)科研人員來(lái)說(shuō)，這意味著什么？

少一次賭體系的決策：

你不需要在實(shí)驗(yàn)一開始就判斷：“這個(gè)蛋白是不是一定需要二硫鍵？"體系已經(jīng)替你準(zhǔn)備好答案。

少一次表達(dá)成功但功能失敗的返工：

不再停留在：SDS-PAGE 看著沒問(wèn)題，但是功能實(shí)驗(yàn)卻反復(fù)失敗。

把精力用在真正重要的問(wèn)題上：

比如親和力、活性、構(gòu)象以及生物學(xué)意義。

“二硫鍵形成不應(yīng)該是：

它應(yīng)該是——一個(gè)合格無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)體系的基本能力。